一、實(shí)習(xí)目的

實(shí)習(xí)是學(xué)生大學(xué)學(xué)習(xí)很重要的實(shí)踐環(huán)節(jié)。實(shí)習(xí)是每一個(gè)大學(xué)生的必修課，它不僅讓我們學(xué)到很多在課堂上根本就學(xué)不到的知識(shí)，還能使我們開闊視野，增長見識(shí)，為我們以后更好把所學(xué)的知識(shí)運(yùn)用到實(shí)際工作中打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

這次有機(jī)會(huì)能夠到疾控中心實(shí)習(xí)，我感到很慶幸。雖然只有兩周的時(shí)間，但是在幾位老師的幫助下，我對(duì)于微生物基礎(chǔ)知識(shí)有了更加深層次的理解，增加了對(duì)微生物知識(shí)的感性認(rèn)識(shí)，鍛煉和提高了獨(dú)立分析和解決實(shí)際問題的能力。與老師相處了兩周，老師很熱心和真誠，盡心盡力的將實(shí)驗(yàn)操作的技能和要點(diǎn)傳授給我，為人很和善，包容我的錯(cuò)誤，讓我有了很大的進(jìn)步。

二、實(shí)習(xí)內(nèi)容

第一天在老師的帶我們?nèi)挝涣私庖幌颅h(huán)境和認(rèn)識(shí)一下老師。到達(dá)后李老師負(fù)責(zé)我們這次實(shí)習(xí)的全過程，她將實(shí)習(xí)過程的注意事項(xiàng)和規(guī)章制度，并且了解各個(gè)實(shí)驗(yàn)室里面的大型儀器。

老師告誡我們到實(shí)習(xí)單位后一定要跟帶領(lǐng)我們的老師的作息時(shí)間一致，不可以早退，不能偷懶，一定要把實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生搞好。我們即將進(jìn)入社會(huì)，在如何與人相處，處理好人際交往進(jìn)行鍛煉和提升，聽到老師的一席話，我受益匪淺，暗暗下決心，一定要好好的實(shí)習(xí)和學(xué)習(xí)，不給學(xué)校丟臉。

這次實(shí)習(xí)，由于老師們正在進(jìn)行的前期實(shí)驗(yàn)都已完成，所以我們在這段時(shí)間主要進(jìn)行《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)----菌落總數(shù)測定》的培訓(xùn)。

開始時(shí)自己就是跟在實(shí)習(xí)老師的后面打打下手，幫忙拿溶劑，洗瓶子，稱量等。在實(shí)習(xí)老師的指導(dǎo)帶領(lǐng)下，我對(duì)實(shí)驗(yàn)室分析的內(nèi)容慢慢的有了很深的了解，自己在一個(gè)多星期的學(xué)習(xí)下也能獨(dú)立完成一些簡單實(shí)驗(yàn)。

主要實(shí)驗(yàn)是菌落總數(shù)的檢驗(yàn)，程序如下：

樣品的稀釋

固體和半固體樣品：稱取25 g樣品置盛有225 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min～10000 r/min均質(zhì)1 min～2 min，或放入盛有225 ml稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min～2 min，制成1:10的樣品勻液。

液體樣品：以無菌吸管吸取25 ml樣品置盛有225 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。

用1 ml無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1 ml，沿管壁緩慢注于盛有9 ml稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。

按1.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1 ml無菌吸管或吸頭。

根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 ml樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1 ml空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。

及時(shí)將15 ml～20 ml冷卻至46 ℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46 ℃1 ℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。

培養(yǎng)

待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 ℃1 ℃培養(yǎng)48 h2 h。水產(chǎn)品30 ℃1 ℃培養(yǎng)72 h3 h。6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4 ml），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。

菌落計(jì)數(shù)

可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units，cfu）表示。

選取菌落數(shù)在30 cfu～300 cfu之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30 cfu的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 cfu的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。

其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。

當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。

菌落總數(shù)的計(jì)算方法